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三令幼虫のwing discで proneural cluster と SMC を染めるマーカー？
Date: Mon, 21 Aug 1995 13:40:09 +0900
From: shayashiアットマークlab.nig.ac.jp (Shigeo Hayashi)
Subject: [Jfly] proneural marker
毎日暑い日が続きます。三島では梅雨明け以来降水量ゼロの日が連続しています。
さて、私たちはesgとsnaのanti-proneural活性を調べる目的で、三令幼虫のwing dis
cでproneural clusterとSMCを染めるマーカーを探しています。ac抗体は試したので
すが我々の手ではdouble stainに使えるほどの感度は得られませんでした。A101はS
MCだけしか染めません。ac-lacZ、sc-lacZなどを使った方がおられましたら感度がど
のようなものが教えてください。その他よいマーカーについての情報があればお教え
願います。
林 茂生
国立遺伝学研究所
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Date: Mon, 21 Aug 1995 15:31:16 +0900
From: uemuraアットマークvirus.kyoto-u.ac.jp
Subject: [Jfly] proneural marker
浜さんが分離された ryXho38 (sca-lacZ)を使わせて頂いたことがあります。
写真例は、Genes and Development 7:429-440 の Fig.2 をご覧下さい。
この質問については、生命研の冨樫さんや北教大の木村さんがお詳しいので
はないですか。
上村匡
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Date: Mon, 21 Aug 1995 16:33:26 +0900
From: kimuraアットマークiwa.hokkyodai.ac.jp (Ken-ichi KIMURA)
Subject: [Jfly] proneural marker
ac-lacZ(Science, 251, 1485-1487, Cross-Regulatory Interactions Between the
Proneural Achaete and Scute Genes of Drosophila,Martinez and C.Modolell,
J.)の発現はかなり強かったと記憶しております。当研究室にあります。必要ならば
ご連絡下さい。
木村 賢一
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Date: Mon, 21 Aug 95 19:19:36 JST
From: shinアットマークlibra.ls.m-kagaku.co.jp (Shin TOGASHI)
Subject: [Jfly] proneural marker
木村さんからac-lacZ の情報が寄せられましたので、違うものを紹介します。
私共の所で分離したsca, Dl のトラップ系統はproneural cluster とその中のSMCをb
-gal 活性で染め出す事が出来ます、また、E(spl)の系統はpuroneural cluster で発
現して、暫くするとSMCでの発現が認められなくなります（A101を乗せると綺麗に穴
が塞がります）。ただし、 Dl, E(spl)の系統には一部分既知のpuroneural cluster
に対応しないと思われる発現があります。これらが林さんの要求に答えられる感度を
示すかは分かりませんが、ご希望でしたら当グループの上田迄、ご連絡下さい。
蛇足ですがb-gal の活性染色を使った、二重染色の場合には固定液の種類や処理時
間には注意された方が良いと思います。私の経験ではformaldehyde, リン酸系の緩衝
液、長時間の固定は活性染色の感度をかなり低下させるように思います。
因みに、ac抗体でうまく行かなかった時の手順を教えていただけますか？
三菱化学生命科学研究所
先端研究部門 神経発生遺伝学研究グループ
冨樫 伸
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Date: Wed, 23 Aug 1995 11:05:30 +0900
From: shayashiアットマークlab.nig.ac.jp (Shigeo Hayashi)
Subject: [Jfly] proneural marker
上村さん、木村さん、富樫さんから貴重なご意見をいただきました。どうもありがと
うございました。
prneural cluster+SMCを染めるのにはsc-lacZ,ac-lacZ, sca-lacZ、Dl-lacZなどが
あると言うことのようです。
> 因みに、ac抗体でうまく行かなかった時の手順を教えていただけますか？
抗体はS.CarrollのlabにいたJim Skeathからもらったモノクロ 990ES F1 と 985 C3
H12 を彼のプロトコールどうりに1:5希釈で混ぜて使いました。固定は４ｍｌPEM,1ml
formaldehyde (37%)と 5ml Heptane (embryoの場合のみ）です。PEM＝100mM PIPE
S pH7.0, 2ml EGTA pH8.0, imM MgSO4です。これを ABC方で検出しましたが結果はば
らつきがあってなかなか難しいものがありました。蛍光の二重染色にこれを使う気に
はなれません。