ヒト型 pEGFP-1 はショウジョウバエでも正常に発現するか？

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ヒト型 pEGFP-1 はショウジョウバエでも正常に発現するか？

Date: Wed, 11 Mar 1998 13:10:45 +0900 (JST)
From: mackアットマークnibb.ac.jp (Makoto Nakamura)
Subject: [Jfly] pEGFP-1

中村＠基生研です、

>　ショウジョウバエの胚に遺伝子銃で遺伝子導入する方法を検討しています。
>具体的にはClontech社のpEGFP-1のMCSにActin 5 C promoter 組み込んだplasmid
>を導入する予定です。しかし、pEGFP-1はEnhanced GFPがコードされており、野生型の
>GFPより発光強度が強いのですが、Human-codon に適するように改変されています。
>そこで、pEGFP-1はショウジョウバエでも正常に発現するのか誰かご存じないでしょ
>うか？

私は、ClonetechのpEGFP-N1（ＮはGFP末にmulti cloning siteがあることを示す）を
用いてショウジョウバエのタンパクのＣ端にfuseしたものを発現（GAL4/UASで）させ
したが、よく光りました。codonの適正化はそれほど影響しないように感じます。

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中　村　　真
〒444 愛知県岡崎市明大寺町字西郷中38　
岡崎国立共同研究機構基礎生物学研究所
形態形成研究部門
TEL 0564-55-7574
FAX 0564-55-7571
E-mail: mackアットマークnibb.ac.jp
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Date: Wed, 11 Mar 1998 15:14:45 +0900 (JST)
From: takeuchiアットマークmanage.ims.u-tokyo.ac.jp (takeuchi)
Subject: [Jfly] Re:pEGFP-1

At 4:36 AM 98.3.11, ITO, Kei wrote:
> ご質問の本題から逸れますが、
>
> >　ショウジョウバエの胚に遺伝子銃で遺伝子導入する方法を検討しています。
> >具体的にはClontech社のpEGFP-1のMCSにActin 5 C promoter 組み込んだplasmid
> >を導入する予定です。...
>
> 遺伝子銃で遺伝子導入しようというのは、P element を使ったのでは
> うまく行かない場合や都合が悪い場合に、第二の手段として使えるよう
> に、ということなのでしょうか。P element を使った方法ではうまく
> いかない、という状況が明確にあって、遺伝子銃を使えばそれを打破で
> きる、という目算があるのならよろしいのですが、ただ単に最近はやり
> の遺伝子銃をハエでも試してみよう、というのでしたら、うまくいって
> もさほど impressive な仕事にはならないし、それを使う人もあまり
> 出てこないように思います。
>
> マウスなどですといまだに新しい（小手先の）技術を確立するだけでか
> なりの反響を呼んだりしますが、ハエですとその辺はだいぶ厳しくて、
> ただ新しいテクニックを作っただけではダメで、それを使って従来は不
> 可能だった何かを発見・立証しないと評価されません。遺伝子銃で
> act-EGFP を打ち込んで光らせただけだと、学会のポスターにはなって
> も、論文にするには難しいかな、とも思ってしまいます。逆に act-EGFP
> は単なるパイロット実験で、それが成功した「次」について、まだ人に
> は言えないような斬新なアイデアが秘められているのだと、素晴らしい
> ですね。
>
> いとう＠ERATO

ご意見ありがとうございました。私はショウジョウバエを直接扱ったことがないので
大変参考になりました。

この実験は実はショウジョウバエへの遺伝子導入が直接の目的ではなく
別の昆虫への遺伝子導入のコントロールにする予定です。

またこれからもよろしくお願いします。いろいろ教えていただくと
助かります。

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　　竹内　秀明
　　東京大学薬学部発生細胞化学教室１研
　　Phone 03-3812-2111 ex. 4821
　　Fax 03-5684-2973
　　E-mail takeuchiアットマークims..u-tokyo.ac.jp
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