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神経筋接合部の抗体染色
Date: Wed, 29 Sep 1999 10:54:39 +0900
From: akomatsuアットマークresearch.twmu.ac.jp (Akira Komatsu)
Subject: [Jfly] 神経筋接合部の抗体染色
東京女子医大の小松です。
久しぶりに抗体染色をしています。濃度等の条件をいろいろ振ってみても、うまく染
まってきません。３令幼虫の神経筋接合部を抗オクトパミン抗体で染めようとしてい
ます。抗体は M. Eckert からもらった凍結乾燥品で、方法は Monastrioti et al. (
1995) に準じています。二次抗体は Chemicon (CPL) 社（コスモバイオ）の biotin-
conjugated affinity purified goat anti-rabbit IgG を使っております。
幼虫の神経筋接合部の染色（できれば神経伝達物質の染色）をしている方、お教え下
さい。どのメーカーのどういう一次抗体ー二次抗体の組み合わせがよかった、という
情報も助かります。蛍光抗体法もやるつもりでおりますので、蛍光の二次抗体につい
てもお知らせ下さい。
よろしくお願いします。
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小松 明（Komatsu, Akira）
東京女子医科大学・医学部・第一生理学教室
〒162-8666 東京都新宿区河田町８−１
Tel: 03-3353-8111 ext.22322 or 22323
Fax: 03-5269-7413
e-mail: akomatsuアットマークresearch.twmu.ac.jp (New!!: twmc --> twmu)
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Date: Thu, 30 Sep 1999 09:44:58 +0900
From: Akinao Nose
Subject: [Jfly] 神経筋接合部の抗体染色
我々のところでは、２次抗体はABC法を使うとき以外はJackson社のものを使っており
、基本的にどの１次抗体でもうまくいっています。ABC法の時のみVectostain kitを
使っています。
それから固定液ですが、通常よく使う４％ホルマリンより、ブアン液を使った方が
NMJの良い染色像が一般に得られます。
抗オクトパミン抗体で染まらなかったということですが、２次抗体ではなく１次抗体
の方があまり強くないのが問題なのではないでしょうか。われわれのところでも以前
に市販の抗オクトパミン抗体で染めたことがあるのですが、あまり良い染色は得られ
ませんでした。
能瀬聡直
東京大学大学院理学系研究科・物理学専攻