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embryoでのBc（black cell）バランサーの見分け方
Date: Thu, 10 Jun 1999 14:30:42 +0900
From: mshinzaアットマークlab.nig.ac.jp (Makiko Shinza)
Subject: [Jfly] Bc バランサー
Jflyの皆様
東大理学部物理・能瀬研の新座と申します。
どなたかembryoでのBc （black cell）の見分け方をご存知の方がいらっしゃいまし
たら、ご連絡いただけないでしょうか。
よろしくお願いします。
新座麻記子
makikoアットマークbio.phys.s.u-tokyo.ac.jp
〒113-0033
東京都文京区本郷７ー３ー１
東京大学理学系研究科物理学教室 能瀬研究室
Tel : 03-5841-4614
Fax : 03-5841-4445
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Date: Thu, 10 Jun 1999 17:20:26 +0900
From: 上田龍
Subject: [Jfly] Bc バランサー
> どなたかembryoでのBc （black cell）の見分け方をご存知の方がいらっしゃいまし
> たら、ご連絡いただけないでしょうか。
> よろしくお願いします。
三菱生命研の上田です。
Bc （black cells）というのはhaemocytoがphenol oxydaseの過剰発現（？）で黒化
するやつですね。幼虫のそれもmatureなもので，漸く識別できるのではありませんか
? embryoで区別できるというのは私も知りたいです。（Bcを載せたバランサーがあ
るのかも知りたいです。）
ところで，GFP balancerは使えないのですか?
１）私自身embryoは本気で見ていない
２）Act5C-GFP balancerはmaternal effectがある（という話）
などで保証することはできないのですが。
どなたかfollowをお願いします。
ところで，（また話が変わりますが），GFP balancerを使うときに，蛍光実体顕微鏡
が必要となりますが，Leicaは高価で，単にバランサーを見分けるだけのために購入
することには抵抗があります。
先日，都立大の相垣さんのところで試作されたtransilluminator型のGFP用蛍光装置
を見ました。これは安価で（たぶん5-10万円？）ハエのGFP balancerを見分けるには
十分だと思いました。興味のある方は相垣さんに連絡を取られると良いでしょう。（
夏の研究会に実物を出されるということです。）
............................................................................
上田龍
神経発生遺伝プロジェクト
プロジェクト研究センター
三菱化学生命科学研究所
〒194-8511 町田市南大谷１１号
phone:042-724-6234
fax: 042-724-6314
...........................................................................
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From: tuemuraアットマークtake.biophys.kyoto-u.ac.jp
Date: Thu, 10 Jun 1999 19:47:36 +0900
Subject: [Jfly] Bc/GFP バランサー
>Bc （black cells）というのはhaemocytoがphenol oxydaseの過剰発現（？）で黒化
>するやつですね。幼虫のそれもmatureなもので，漸く識別できるのではありませんか
>? embryoで区別できるというのは私も知りたいです。
うーん、何かが記憶から蘇って１０年前の論文を見直しました。experimental proce
dures で 以下のように書いてありました（書きました）。
After dechorionation, unhatched embryos with distinct dots (numb Bc/ numb
Bc) and Bc+ 1st instar larvae (numb Bc/CyO) were collected separately....
御存知のように Bc は３齢幼虫では明かな優性マーカーですが、孵化直後では、Bc/B
c と Bc/+ の差はかなりあったような、、（でないと私はウソを書いたことになる）
>Bcを載せたバランサーがあるのかも知りたいです。
まさしくこの質問を Ed Grell にして、彼は笑って首を振ったような、、うろ覚えば
かりで申し訳ないです。
新座さん、胚のどのステージをご覧になりたいのですか？
>ところで，GFP balancerは使えないのですか?
>１）私自身embryoは本気で見ていない
>２）Act5C-GFP balancerはmaternal effectがある（という話）
>などで保証することはできないのですが。
>どなたかfollowをお願いします。
（１）早いステージから明快に判別できることを期待したのですが、私の眼でははっ
きりしませんでした。例えば、B#4559 (FM7 [Act-GFP]) の場合、孵化直前になって
初めて gut が強く光り出して、安心して判別可能になりました。
（２）Ubi-GFP バランサー（すぐ番号が出ない）も、孵化直前まではっきりしません
。この株では中枢がボンヤリと光りってました。Act-GFP も Ubi-GFP も、胚が早い
ステージからビカビカ光ってくれると単純に期待したのですが。
（３）CyO [kr-GFP] を頂いて見たのですが、st10 あたりにシグナルに気付き、st 1
3 から15 にかけてdorsal vessel のシグナルがわかり易いです。ただ、今度は孵化
前後にはわからなくなりました。別の方から聞いた話と食い違っているのですが、、、
私の見誤りがあってはいけませんので、他の方の経験を教えて下さい。
上村 匡 (UEMURA, Tadashi)
京都大学 大学院 生命科学研究科
統合生命科学専攻 多細胞体構築学
〒６０６−８５０２
京都市左京区北白川追分町
（電話）０７５−７５３−４１９５（直）
（ファックス）０７５−７５３−４１９７（直）
（メール）tuemuraアットマークtake.biophys.kyoto-u.ac.jp
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Date: Thu, 10 Jun 1999 20:18:48 +0900
From: "ITO, Kei"
Subject: [Jfly] GFP microscope (was: Bc バランサー)
At 5:20 PM +0900 99.6.10, 上田龍 wrote:
> ところで，（また話が変わりますが），GFP balancerを使うときに，蛍光実体顕微鏡
> が必要となりますが，Leicaは高価で，単にバランサーを見分けるだけのために購入
> することには抵抗があります。
> 先日，都立大の相垣さんのところで試作されたtransilluminator型のGFP用蛍光装置
> を見ました。これは安価で（たぶん5-10万円？）ハエのGFP balancerを見分けるには
> 十分だと思いました。興味のある方は相垣さんに連絡を取られると良いでしょう。（
> 夏の研究会に実物を出されるということです。）
バランサーを見分けるだけで特に高い性能は要求しないかわり、廉価
な方がいい、というような蛍光実体顕微鏡の需要って、かなり大きい
のでしょうか？現在はどこの会社も、蛍光タイプは各社の最高機種を
modify したものばかりですが、廉価なタイプの需要が多ければそう
いう機種の開発をメーカーに要求していくこともできると思います。
こんど某社の開発担当が訪ねてきますので、需要があるならその旨伝
えたいので、ご意見お聞かせ下さい。（相垣さんにパテント料入った
りして。）
いとうκ
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Date: Thu, 10 Jun 1999 21:20:13 +0900
From: Yoshimasa Yagi
Subject: [Jfly] Bc/GFP バランサー
> >Bc （black cells）というのはhaemocytoがphenol oxydaseの過剰発現（？）で黒化
> >するやつですね。幼虫のそれもmatureなもので，漸く識別できるのではありませんか
> >? embryoで区別できるというのは私も知りたいです。
>
> うーん、何かが記憶から蘇って１０年前の論文を見直しました。experimental proce
> dures で 以下のように書いてありました（書きました）。
> After dechorionation, unhatched embryos with distinct dots (numb Bc/ numb
> Bc) and Bc+ 1st instar larvae (numb Bc/CyO) were collected separately....
>
> 御存知のように Bc は３齢幼虫では明かな優性マーカーですが、孵化直後では、Bc/B
> c と Bc/+ の差はかなりあったような、、（でないと私はウソを書いたことになる）
>
> >Bcを載せたバランサーがあるのかも知りたいです。
>
> まさしくこの質問を Ed Grell にして、彼は笑って首を振ったような、、うろ覚えば
> かりで申し訳ないです。
昔、Bcをembryoで識別できるか、見てみろ、というボスに言われて観察してみました
が、
noという結果で、結局、blue balancerを使いました（生きたまま観察する必要はなかっ
たので）。red bookには、ホモでは11時間以降の胚から、ヘテロでは１令後期から
black cell
が見えるようになる、ヘテロでは１令の間にblack cellができてくる、という記載に
なってます。
当時使ったのが、Gla Bcでした。Glaなので、balanceできる領域が限られ、
Bcが外れてくる可能性は考えられるのですが、
問題にならない程度かどうかについては検定しませんでした。
ので、embryoではbalancer側を識別するのではなく逆なら使えるかもしれません。
☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆☆
八木克将 YAGI, Yoshimasa
東京大学薬学部神経生物物理学教室
113-0033 東京都文京区本郷7-3-1
Tel: 03-5841-4803
Fax: 03-5841-4805
e-mail: yyagiアットマークmayqueen.f.u-tokyo.ac.jp
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Date: Thu, 10 Jun 1999 14:26:24 GMT
From: mtatenoアットマークbiol1.bio.nagoya-u.ac.jp (minoru tateno)
Subject: [Jfly] Bc/GFP バランサー
名大西田研の館野と申します。
>
>（１）早いステージから明快に判別できることを期待したのですが、私の眼でははっ
>きりしませんでした。例えば、B#4559 (FM7 [Act-GFP]) の場合、孵化直前になって
>初めて gut が強く光り出して、安心して判別可能になりました。
>（２）Ubi-GFP バランサー（すぐ番号が出ない）も、孵化直前まではっきりしません
>。この株では中枢がボンヤリと光りってました。Act-GFP も Ubi-GFP も、胚が早い
>ステージからビカビカ光ってくれると単純に期待したのですが。
>（３）CyO [kr-GFP] を頂いて見たのですが、st10 あたりにシグナルに気付き、st 1
>3 から15 にかけてdorsal vessel のシグナルがわかり易いです。ただ、今度は孵化
>前後にはわからなくなりました。別の方から聞いた話と食い違っているのですが、、、
>
>私の見誤りがあってはいけませんので、他の方の経験を教えて下さい。
>
（１）に関して、私も以前、st13前後の胚でCyO, [Act-GFP]JMR1(B-4533)で遺伝子型
を判別しようとしましたが、やはりよくわかりませんでした。
**********************************************
館野 実
〒464-8602 名古屋市千種区不老町
名古屋大学大学院 理学研究科 生命理学専攻
形態統御学講座 発生生物学研究グループ(動物学第２講座）
TEL : 052-789-2508 FAX : 052-789-2511
E-mail : mtatenoアットマークbio.nagoya-u.ac.jp
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Date: Fri, 11 Jun 1999 10:46:47 +0900
From: Chihiro Hama
Subject: [Jfly] Bc/GFP バランサー
国立精神神経センターの浜です。
> （１）早いステージから明快に判別できることを期待したのですが、私の眼でははっ
> きりしませんでした。例えば、B#4559 (FM7 [Act-GFP]) の場合、孵化直前になって
> 初めて gut が強く光り出して、安心して判別可能になりました。
> （２）Ubi-GFP バランサー（すぐ番号が出ない）も、孵化直前まではっきりしません
> 。この株では中枢がボンヤリと光りってました。Act-GFP も Ubi-GFP も、胚が早い
> ステージからビカビカ光ってくれると単純に期待したのですが。
> （３）CyO [kr-GFP] を頂いて見たのですが、st10 あたりにシグナルに気付き、st 1
> 3 から15 にかけてdorsal vessel のシグナルがわかり易いです。ただ、今度は孵化
> 前後にはわからなくなりました。別の方から聞いた話と食い違っているのですが、、、
Bcの話からはそれてしまいますが、上村さんの（２）に関連してひとつ。
Bloomington, #4887のTM6B,Ubi-GFPは初期胚から強く光りますが、ホモとヘテロの区別がつきません。母性効果があるからだと解釈しています。孵化直前になってホモはシグナルが消失し、ヘテロは中枢神経系が光ります。一齢幼虫以降は区別できます。
ついでに（３）に関連して質問させてください。
mutant embryoを早い時期から区別できる第３染色体のGFPバランサーをお持ちか御存じの方おられませんか。第１、第２染色体に関しても他に情報があれば有り難いです。
浜
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国立精神神経センター・神経研究所
遺伝子工学研究部
浜 千尋
〒187-8502
東京都小平市小川東町4-1-1
TEL: 042-346-1725
FAX: 042-346-1755
hamaアットマークncnp.go.jp （アドレスが少し変わりました。）
****************************
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Date: Fri, 11 Jun 1999 11:49:58 +0900
From: ttabataアットマークhgc.ims.u-tokyo.ac.jp (Tetsuya Tabata)
Subject: [Jfly] Bc/GFP バランサー
> ついでに（３）に関連して質問させてください。
>
>mutant
>embryoを早い時期から区別できる第３染色体のGFPバランサーをお持ちか御存じの方おら
>れませんか。第１、第２染色体に関しても他に情報があれば有り難いです。
>
Tom KornbergのところでKr-GFP（Gal4/UASを介していたと思います）をのせたX, 2,
3のbalancerを作っています。上村さんが記述された発現profileだと思いますが私は
見たことがありません。publicationの予定があるらしいので、試される時は、直接T
omから入手されるほうが良いと思います。あるいはもうstock centerに入っているか
もしれません。
多羽田哲也
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Date: Fri, 11 Jun 1999 13:38:40 +0900
From: mshinzaアットマークlab.nig.ac.jp (Makiko Shinza)
Subject: [Jfly] Bc/GFP バランサー
みなさま、多くの情報ありがとうございます。
>新座さん、胚のどのステージをご覧になりたいのですか？
stage１６以降孵化直前までのembryoを、染色せずに見分けたいと思っています。Bc
では、バランサーを保持しているものとそうでないものを見分けることは無理なので
しょうか？
また、Gla Bcに限らず、この時期のembryoを区別できる第２染色体のバランサーに関
する情報があれば、たいへん嬉しいです。
度重なりますが、よろしくお願いします。
新座麻記子
makikoアットマークbio.phys.s.u-tokyo.ac.jp
〒113-0033
東京都文京区本郷７ー３ー１
東大理学部物理学教室 能瀬研究室
Tel : 03-5841-4614
Fax : 03-5841-4445
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From: mshinzaアットマークlab.nig.ac.jp (shinza makiko)
Subject: [Jfly] [Jfly] Bc/GFP バランサー
Date: Fri, 11 Jun 1999 14:24:15 +0900
みなさま、多くの情報ありがとうございます。
>新座さん、胚のどのステージをご覧になりたいのですか？
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From: yasukoアットマークcell.tsukita.jst.go.jp
Date: Fri, 11 Jun 1999 18:34:20 +0900
Subject: [Jfly] Bc/GFP バランサー
京大の秋山康子です。
> >mutant
> >embryoを早い時期から区別できる第３染色体のGFPバランサーをお持ちか御存じの方お
>ら
> >れませんか。第１、第２染色体に関しても他に情報があれば有り難いです。
GFPバランサーに関してですが、私たちは最近、engrailed-promoter-NLS-GFPのコン
ストラクトを持つTM3バランサーを樹立しました。（W; Dr/TM3 en-NLS-GFP)
まだpublicationの予定はないのですが、興味のある方にお分けすることができます
。このバランサーではembryoのステージ１１からホモ・ヘテロの区別をすることがで
きます。（がんばればステージ１０くらいから）
また、CyOにも暇を見つけてインジェクションする予定です。
小田広樹 秋山康子
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小田(秋山) 康子 Yasuko Akiyama-Oda
京都大学・医学部・分子細胞情報学
日本学術振興会特別研究員（PD）
〒600-8813 京都市下京区中堂寺南町17
京都リサーチパーク内 月田細胞軸プロジェクト
phone: 075-315-7912
fax: 075-315-6420
e-mail: yasukoアットマークcell.tsukita.jst.go.jp
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