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total RNA をきれいに効率よく取る方法
Date: Tue, 22 Jan 2002 13:19:17 +0900
Subject: [Jfly] total RNA
From: "武井ゆき"
Jflyの皆様
東大分生研の武井と申します。
現在、当ラボでwing discからtotal RNAをきれいに効率よく、
10 microgram 程度とれるキットを探しています。
どなたかよいものをご存じの方がいらっしゃいましたら、
お知らせ下さい。よろしくお願い致します。
--
武井ゆき
東京大学大学院理学系研究科生物化学専攻
形態形成研究分野 博士課程1年
yktakeiアットマークims.u-tokyo.ac.jp
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Date: Tue, 22 Jan 2002 09:38:34 +0100
Subject: [Jfly] [Jfly] total RNA
From: Tomoatsu Ikeya
on 02.1.22 5:19 AM, 武井ゆき at yktakeiアットマークims.u-tokyo.ac.jp wrote:
池谷と申します。
レスが無いようなので。
ここのラボではQuagen RNeasyを使っています。
カラムのcapacityは100μg のようですし、前処理もわりと簡単では。
なにより、チューブ一本です。
workすることは確かめてます。
--
Tomoatsu Ikeya
University of Zurich
Winterthurerstrasse 190
CH-8057 Zurich, Switerland
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Date: Tue, 22 Jan 2002 22:01:26 +0900
From: matuno motomi
Subject: [Jfly] total RNA
遺伝研の松野と申します。
私も以前、QIAGENのRNeasy Mini Kitを使ってtotal RNAをとりました。
約100個体のeye discからtotal RNAを10ugほどとりましたが、
とてもきれいにとれています。
松野 元美
Motomi Matsuno
�ｳ411-8540 静岡県 三島市 谷田 1111
総合研究大学院大学・遺伝学専攻
国立遺伝学研究所 発生遺伝学研究部門
TEL 0559-81-6809
FAX 0559-81-6768
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Date: Wed, 23 Jan 2002 10:30:02 +0900
From: TSUJIMURA Hidenobu
Subject: [Jfly] total RNA
農工大の辻村です。
キットの話題に割り込んで申し訳ないのですが、松野さんに質問します。
多数の成虫盤をとりだすにはかなりの時間がかかったと思いますが、
解剖からキットに行くまでのことを教えていただけませんか。
解剖は、どんな溶液中で行われましたか。また、室温ですか。
取り出した成虫盤はその後どのように処理されましたか。
多数集めるまで、どのように保存されましたか。溶液、温度。
などです。
よろしくお願いします。
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Date: Wed, 23 Jan 2002 11:16:32 +0900
From: matuno motomi
Subject: [Jfly] total RNA
遺伝研の松野です。
まさかこんな質問がくるとは思ってもいませんでした。。。
御質問の件ですが、私は幼虫を室温でPBS中で解剖し、eye disc以外の組織を
除いたあとで、氷上においたPBSの入った1.5mlチューブへ移すという
作業をくり返しました。
その後、チューブの中のPBSはできるだけ除き、液体窒素で凍らせて
-80℃で保存しました。
私は一度に100匹が自分の限界でしたので、このような操作を目的数の
discが集まる迄行いました。
このようにして集まったdiscに関してはキットに従ってRNA抽出を行いました。
松野 元美
Motomi Matsuno
�ｳ411-8540 静岡県 三島市 谷田 1111
総合研究大学院大学・遺伝学専攻
国立遺伝学研究所 発生遺伝学研究部門
TEL 0559-81-6809
FAX 0559-81-6768
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Date: Thu, 24 Jan 2002 16:01:28 +0900
Subject: [Jfly] total RNA
From: "武井ゆき"
東大分生研の武井です。
初めての投稿で緊張してしまい、舌足らずな質問であったにもかかわらず、
お返事をいただき、ありがとうございました。
早速検討して購入したいと思います。
これからもよろしくお願いいたします。
--
武井ゆき
東京大学大学院理学系研究科生物化学専攻
形態形成研究分野 博士課程1年
yktakeiアットマークims.u-tokyo.ac.jp
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Date: Fri, 25 Jan 2002 13:49:23 +0900
From: TSUJIMURA Hidenobu
Subject: [Jfly] total RNA
松野 さま
農工大の辻村です。再度、細かな質問で申し訳ありませんが、
成虫盤のホモジナイズはどのようになされたか教えていただけませんか。
つぶすための器具、凍ったままか溶かしてからか などです。
辻村秀信
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Date: Fri, 25 Jan 2002 18:54:40 +0900
From: matuno motomi
Subject: [Jfly] total RNA
遺伝研の松野です。
ホモジナイズは1.5mlチューブ用のホモジナイザー（メーカー
は不明です、すみません）を使って手で行いました。
discですので、潰れたかどうかは分かりにくいのですが。
なお、ホモジナイズは凍ったままのサンプルにキットの溶液を
加えて行いました。
松野 元美
Motomi Matsuno
�ｳ411-8540 静岡県 三島市 谷田 1111
総合研究大学院大学・遺伝学専攻
国立遺伝学研究所 発生遺伝学研究部門
TEL 0559-81-6809
FAX 0559-81-6768