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Golic's の Targetted Gene ノックアウト法の改良・成功例？
Date: Tue, 15 Jan 2002 20:16:43 +0900
From: Shin SUGIYAMA
Subject: [Jfly] Golic's Targetted Gene KO Method
名大の杉山です
いま、修士の古川君とノックアウトをやる相談をしています。
手許の文献は：
１）00/8/23付の Golicからのプロトコール
２） Rong YS, Golic KG. A targeted gene knockout in Drosophila. Genetics.
2001 Mar;157(3):1307-12.
３） Rong YS, Golic KG. Gene targeting by homologous recombination in
Drosophila. Science. 2000 Jun 16;288(5473):2013-8.
そこで質問、お願いがあります。
A)これらの文献が出た以降の改良,成功例を御存知だったら教えて下さい。
B)00/8/23付のプロトコールに書かれていて、その時点で未確認の手法である
I-CreIによりduplicateされたtarget geneをtandemでなくする試みは成功しているの
でしょうか？
I-CreIの発現系統も送られて来ていますので成功しているのであろうと思いますが
確認しておきたいのです。
何故Bの質問をするかを説明しますと；
我々が壊したい遺伝子は幾つかの短いexonと長いintronから構成されています。
彼等の方法でends-in KOをすると、
（3'に変異のあるターゲット遺伝子）+（マーカー）+（5’に変異のあるターゲット
遺伝子）
という状態が作られます。
もしこれでマーカーをまたぐようにスプライシングが起こるようなことがあれば
正常な転写産物が生産される可能性が残ると思います。
可能性は低いにしても排除しておきたいのです。
I-CreIが使えればこの問題は解決します。
こういう質問を頻繁に受けているであろうGolic本人を煩わせる前に
ここで質問させていただきました。
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Date: Thu, 17 Jan 2002 00:53:38 +0900
From: "ITO, Kei"
Subject: [Jfly] Golic's Targetted Gene KO Method
At 8:16 PM +0900 02.1.15, Shin SUGIYAMA wrote:
> そこで質問、お願いがあります。
> A)これらの文献が出た以降の改良,成功例を御存知だったら教えて下さい。
Cold Spring Harbor の meeting で「この方法で成功した人、失敗した人、
手を挙げてぇ」とやった演者がいましたが、7,8人が手を挙げて、ちょうど
５分５分だったと思います。で良かったでしたっけ？ ＞ 他の参加者の方
いとう