 | Jfly ディスカッション |
Discussion Menu | Jfly Japanese Home Page | Jfly English Home Page
強力なGAL4 driver
Delivered-Date: Wed, 5 Feb 2003 10:56:37 +0900
From: Susumu Hirose
Subject: [Jfly] 強力なGAL4 driverが有ったら教えて下さい。
皆様
Actin 5CでdriveされたGAL4を用いてembryoでinsulator結合タンパク質遺伝子の
RNAiを行いましたが、mRNA levelがほとんど減少しませんでした。blastderm
embryoで使えるActin 5Cよりもっと強力なGAL4 driverが有ったら教えて下さい。
尚、insulatorのassayにはenのstripe 2 enhancerとstripe 3 enhancerを用いて
いる ので、enの発現もしくはその直前にRNAiを行うつもりです。
広瀬 進
国立遺伝学研究所
＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊
Date: Wed, 05 Feb 2003 11:43:14 +0900
Subject: [Jfly] 強力なGAL4 driver が有ったら教えて下さい。
From: Tadashi Uemura
in vitro で合成した dsRNA を胚に注射して RNAi を効かすのではなく、Gal4-UASに
よる transgenc RNAi を胚で効かせようと試みられたのですね。結論から言うと我々
は苦い経験をしました。maternal-GAL4 と zygotic strong GAL4 の組み合わせなど、
何通りか試みましたが、胚での遺伝子ノックダウンはなかなかうまくいきませんでし
た。
ある UAS-dsRNA strain を用い、apterous-Gal4 とクロスして、成虫原基でノックダ
ウンを確認し、成虫で表現型を出せることを確かめておきます。同じ UAS-dsRNA
strain を用いても、胚でノックダウンさせ表現型を出させることは期待どおりにい
きませんでした。それなりの解釈をしていますので、ご興味があればお電話下さい。
ただし、我々が試した時点では、cDNA-spacer-cDNA construct を用いており、RNAi
の効率がより高いと報告されている genomic-cDNA hybrid construct はあまり試し
ていません。
上村 匡
京都市左京区聖護院川原町５３
京都大学ウイルス研究所
遺伝子動態調節研究部門
分子遺伝学研究分野
＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊
Date: Wed, 05 Feb 2003 11:48:52 +0900
Subject: [Jfly] 強力なGAL4 driver が有ったら教えて下さい（再送）
From: Tadashi Uemura
すみません。先ほどの回答を少しだけ修正させて下さい。
in vitro で合成した dsRNA を胚に注射して RNAi を効かすのではなく、Gal4-UASに
よる transgenc RNAi を胚で効かせようと試みられたのですね。結論から言うと我々
は苦い経験をしました。maternal-GAL4 と zygotic strong GAL4 の組み合わせなど、
何通りか試みましたが、胚での遺伝子ノックダウンはなかなかうまくいきませんでし
た。
ある UAS-dsRNA strain を用い、apterous-Gal4 や engrailed-GAL4 とクロスして、
成虫原基や蛹の翅でノックダウンを確認し、成虫で表現型を出せることを確かめてお
きます。同じ UAS-dsRNA strain を用いても、胚でノックダウンさせ表現型を出させ
ることは期待どおりにいきませんでした。それなりの解釈をしていますので、ご興味
があればお電話下さい。
ただし、我々がかつて試した時は、cDNA-spacer-cDNA construct を用いており、
RNAi の効率がより高いと報告されている genomic-cDNA hybrid construct はあまり
試していません。
上村 匡