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成虫でのルシフェラーゼ・アッセイ
From: "Takayuki Horiuchi"
Subject: [Jfly] 成虫でのルシフェラーゼ・アッセイ
Date: Mon, 8 Sep 2003 14:54:00 +0900
J-Flyの皆様
都立大、相垣研でlolaのtrans-splicingの仕事をしています、堀内貴之です。
ルシフェラーゼ遺伝子を導入した成虫のハエから、ルシフェラーゼ活性を検出し
たいと考えております。できればホタルとウミシイタケのルシフェラーゼを使っ
てdual assayを行いたいのですが、どなたかプロトコールご存知でしたらお教え
ください。よろしくお願いいたします。
堀内貴之
Takayuki Horiuchi
Department of Biological Sciences
Tokyo Metropolitan University
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From: "Kanae Ando Iijima"
Subject: [Jfly] RE: [Jfly] 成虫でのルシフェラーゼ・アッセイ
Date: Mon, 8 Sep 2003 13:43:42 -0700
堀内様、
Cold Spring Harbor Laboratory の飯島ー安藤 香奈絵です。
私たちはCRE−Luciferaseの活性を見ているのですが（Belvin et al., Neuron
1999）、プロメガのキットを使っています。ハエの頭 5-10匹を取って、キットにつ
いてくる lysis bufferを一匹あたり５-１０μL入れてつぶします。これを希釈し
て、キットのプロトコルどおり、Linearになるところで測っています。Dualはやった
ことがありません。
in vivoでOscillationを測るときは、Perkin ElmerのTopCountという機械を使ってい
ます。これはCSHL PressのDrosophila Protocolsという本に詳しく出ています。
Kanae Ando Iijima, Ph. D.
Cold Spring Harbor Laboratory
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From: "Takayuki Horiuchi"
Subject: [Jfly] 成虫でのルシフェラーゼ・アッセイ
Date: Wed, 10 Sep 2003 10:19:56 +0900
飯島ー安藤様、村田様、上山様
たいへん参考になりました。
ありがとうございました。
堀内貴之